Enterobakterite ja mõnede vibrioonide diferentsiaalses määramises on Voges-Proskaueri reaktsioon erilisel kohal. Test põhineb bakterite võimel kääritada glükoosi atsetoiini moodustamiseks.
Uurimisprotsessi olemus
Mikrobioloogias kasutatakse Voges-Proskaueri reaktsiooni sageli enterobakterite (sealhulgas pseudotuberkuloosi ja enterokoliidi patogeenide), Escherichia coli ja spoore moodustavate aeroobide Yersinia perekonna eristamiseks. Tulemus visualiseeritakse söötme värvimisega, kui lisatakse teatud reaktiivid.
See test kuulub IMViC seeriasse (lühend sõnadest Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate) – identifitseerimistestide rühm, mis sisaldab diferentsiaalseid määratlusi:
- indooliga, põhineb trüptofaani lagunemisel indooliks, kasutatakse Kovacsi või Ehrlichi reaktiivi juuresolekul;
- kasutadesmetüülroth ehk metüülpunane, mis tuvastab glükoosi metaboliseerumise tulemusena antud pH;
- Voges-Proskaueri reaktsioonid atsetüülmetüülkarbinooli tuvastamiseks;
- tsitraadi kasutamine koos värvimuutusega söötme leelistamise tagajärjel.
Protsessi olemus seisneb diagnoositud bakterite esinemise visualiseerimises nende moodustunud atsetoiini ja söövitava kaaliumkloriidi koostoime tõttu hapniku juuresolekul. Atsetüül-metüülkarbinool oksüdeeritakse diatsetüüliks, mis moodustab helepunase või roosa ühendi. Suurendage testi tundlikkust, lisades enne söövitava kaaliumkloriidi lisamist alfa-naftooli.
Testiseade
Vogese-Proskaueri reaktsiooni koostis hõlmab mikroorganismide eelnevat kultiveerimist. Puhaskultuur külvatakse Clarki diferentsiaaldiagnostilisele söötmele, mille üks variatsioon on Clarki puljong (ilma agar-agarit lisamata). Kasutatakse kas valmis söödet või valmistatakse iseseisv alt. Koostisosade hulka kuuluvad:
- 5g peptooni;
- 5g glükoosi;
- 5g kahealuselist kaaliumfosfaati;
- 1L destillaati.
Uuringu ajal inokuleeritakse kultuur steriilse bakterioloogilise silmusega vedelasse söötmesse. Kogus - 5 ml katseklaasis pluss kontroll. Inkubeerimine toimub temperatuuril 35-37 kraadi kaks päeva. Järgmisena viiakse Voges-Proskaueri reaktsiooni uuring läbi etapiviisiliselt:
- 2, 5 ml puljongikultuuri viiakse steriilsesse katsutisse.
- Lisage kuus tilka alfa-naftooli (5% alkoholilahust).
- Lisage 40%söövitava kaaliumi lahus koguses 0,1 ml või kaks tilka.
- Segamine toimub katseklaasi õrn alt loksutades.
- Hinda tulemust pärast 15 minuti möödumist katse algusest.
Alternatiivne katsemeetod on üleöö inkubeerimine, mille aega lühendatakse 18 tunnini või kuni ööpäevani. Lisaks sellele meetodile kasutatakse ka ekspresstesti: kultuur sisestatakse silmusena 2 ml söötmesse, inkubeeritakse umbes neli tundi, seejärel lisatakse võrdses koguses 2-3 tilka reaktiive, segatakse ja tulemust hinnatakse kümne minuti pärast.
Kontroll on üks kopsupõletiku Klebsiella pneumoniae tekitajatest – tüvi atcc 13883.
Tulemuse hindamine
Pärast nõutavat aega pärast reaktiivide lisamist (5 kuni 15 minutit) tuleks märgata kirsipunast värvi, millel on väljendunud positiivne reaktsioon, punast ja roosat - nõrga positiivse reaktsiooniga. Negatiivse tulemusena muudatust ei registreerita.
Liigne söövitav kaaliumkloriid lahuses võib jäljendada positiivset reaktsiooni, määrdudes vasevärvi. Sel juhul tuleks registreerida testitud koloonia negatiivne vastus. Samuti ilmneb vase värvumine juhtudel, kui hinnang antakse tund pärast reaktiivide lisamist.
Tulemuse hindamisel tuleb arvestada, et uuritavate mikroorganismide pikaajaline kultiveerimine (üle kolme päeva) viib söötme hapestumiseni, mis võib viia uuringu ebaõige tulemuseni. Reaktsioon võib olla kergelt positiivne võivalenegatiivne.
Nõuded testreaktiividele
Voges-Proskaueri reaktiivid peavad vastama nõuetele, nagu õige kontsentratsioon, kõrge puhtus ja stabiilsus, mis saavutatakse nõuetekohase ladustamisega.
Kasutusvalmis testikomplektid sisaldavad tavaliselt 100 või enama kasutuskorra jaoks mõeldud reaktiive ja on plast- või toonitud klaasist viaalides. Kvaliteeti reguleerib vastav dokumentatsioon.
