Bakteriaalsete infektsioonide mitmekesisus nõuab patogeeni selget tuvastamist ja selle liigi määratlust. Mikroorganismi tüübi määramisel aitavad mikrobioloogid selle toonilised omadused – mikroobi vastuvõtlikkus erinevate värvainetega värvimisele. See meetod võimaldab teil uurida patogeeni morfoloogiat. Bakterite toonilised omadused on mikrobioloogia valdkonna praktiliste ja teoreetiliste uuringute jaoks väga olulised.
Mikroobiuuringud
Bakterioloogias on mikroorganismide värvimiseks palju meetodeid. Kõik need põhinevad bakterite toonilistel omadustel. Värvimine võimaldab teil määrata nende kuju, struktuuri, suuruse, suhtelise asukoha. See võimaldab lahendada üldbioloogia ja võrdleva mikrobioloogia mikroorganismide tüüpide süstematiseerimise probleeme.
Miks neid värvida
Bakterid on praktiliseltläbipaistvad organismid ja ilma värvimist kasutamata on need tavapärase mikroskoopia jaoks halvasti nähtavad. Objektide uurimiseks võite kasutada spetsiaalset tüüpi mikroskoopiat (faasikontrast, tumeväli), kuid kõige lihtsam on värvida, misjärel muutuvad bakterid tavalises valgusmikroskoobis nähtavaks.
Proovi ettevalmistamine
Olenemata kasutatavast värvimistehnikast kehtivad uuritava objekti ettevalmistamisel ühtsed reeglid. Järgmised etapid on kohustuslikud:
- Steriilsed instrumendid teevad slaidile määrdu.
- Proovi kuivatatakse. Seda tehakse toatemperatuuril või kasutades kuivatuskappe.
- Järgneb fikseerimise etapp - mikroorganismid kinnitatakse klaasile spetsiaalsete ühenditega.
- Õige värvimine - proov kaetakse teatud ajaks värvainega, misjärel see pestakse maha.
- Lõplik kuivatamine – proov kuivatatakse uuesti.
Kõige levinumad värvained
Kõige sagedamini kasutatavad värvained põhinevad erineva happeväärtusega (pH) aniliinil. Enamik värvaineid on pulbrid, mis on alkoholis lahjendatud.
Värve, milles katioonid on värvaineteks, nimetatakse aluselisteks (pH suurem kui 7). Neid saab kasutada mikroorganismide värvimiseks punase (magenta, safraniini), violetse (metüülviolett, tioniin), sinise (metüleensinine), rohelise (malahhiitroheline), pruuni (krüsoidiin) ja musta (induliin) värviga.
Värve, milles värvaineteks on anioonid, nimetatakse happelisteks (pH alla 7). Need värvivad proovi punaseks (eosiin), kollaseks (pikriin) või mustaks (nigrosiin).
Seal on rühm neutraalseid värvaineid (näiteks rodamiin B), kus nii katioonid kui ka anioonid toimivad värvainetena.
Kultuur surnud või elus
Värvimismeetodid jagunevad uuritava proovi eluvormi järgi kahte rühma.
- Eluaegne (eluaegne) värvimine. Seda mikroorganismide omaduste uurimise meetodit kasutatakse eluskudede uurimisel, mis võimaldab jälgida mikroobide elutähtsaid protsesse. Selle värvimise jaoks kasutatakse madala toksilisuse ja suure läbitungimisvõimega värvaineid.
- Elujärgne värvimine. See on surnud või hukkunud mikroorganismide värvimine. Tänu bakterite toonimisomadustele määravad mikrobioloogid nende struktuuri. Just seda värvimist kasutatakse kõige laialdasem alt.
Grampositiivsed ja gramnegatiivsed
Just need bakterite omadused leiate erinevate ravimite juhistest. See bakterite toonimisomaduste uurimise meetod põhineb emajuurviolettvärvi ja joodi fikseerimise kasutamisel. See on 1884. aastal selle välja pakkunud Taani arsti Hans Christian Grami tehnika. Selle värvimise tulemusena jagatakse bakterid kahte rühma:
- Gram (+) – muutke siniseks(stafülokokid ja streptokokid).
- Gram (-) – plekk roosast punaseks (enterobakterid, salmonella, E. coli).
Erinevad värvimistulemused tulenevad bakteriseinte erinevatest toonimisomadustest. Grami peitsimeetod on mõnede nakkushaiguste diagnoosimisel endiselt peamine.
Muud värvimistehnikad
Iseloomustame veel mõnda bakterioloogias laialdaselt kasutatavat meetodit.
- Ziehl-Nelsoni meetod – määrab bakterite happekindluse. See tuvastab tuberkuloosi ja mükobakterioosi tekitajad.
- Romanovsky-Giemsa tehnika – värvib atsidofiilsed (äädikhape ja piimhape) bakterid punaseks ja basofiilsed (spiroheedid ja algloomad) siniseks.
- Morozovi tehnika – määrib bakterid pruuniks ja muudab nende lipukesed nähtavaks.
Eosed on näha
Tsieli fuchciniga värvimine võimaldab näha bakterite eoseid. Kuna need on pärast värvimist roosat värvi, on need siniste bakterite taustal selgelt nähtavad. See meetod on ka bakterioloogia tööriist ja sellel on suur praktiline tähtsus.
